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HAKATA胎牛血清暑期*

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內(nèi)毒素檢測(cè)

內(nèi)毒素，又叫脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS），存在于革蘭氏陰性菌的細(xì)胞外膜。臨床上，內(nèi)毒素作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示，如腦膜炎球菌。動(dòng)物體內(nèi)，內(nèi)毒素能夠?qū)е掳l(fā)熱或者誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)；細(xì)胞培養(yǎng)中，內(nèi)毒素能夠誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)異常。

通常，采用鱟阿米巴樣細(xì)胞裂解實(shí)驗(yàn)（LAL檢測(cè)）檢測(cè)內(nèi)毒素水平。LAL是從美洲鱟（見(jiàn)圖一）的血液中制備的，對(duì)內(nèi)毒素非常靈敏，在微量?jī)?nèi)毒素存在情況下就凝結(jié)。阿米巴樣細(xì)胞相當(dāng)于哺乳動(dòng)物的白細(xì)胞。

特異性血清及其加工方式

熱鈍化

胎牛血清的常規(guī)處理方式是熱鈍化，即放在56°水浴30分鐘；其目的是使血清中的補(bǔ)體成分及一些未知的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制分子失活。

與胎牛血清的其它加工方式一樣，熱鈍化處理過(guò)程必須小心謹(jǐn)慎，因?yàn)檠逯械纳L(zhǎng)因子容易在較高溫度或者較長(zhǎng)時(shí)間加熱條件下失活，甚至產(chǎn)生沉淀。

Life Technologies公司的Invitrogen及HAKATA品牌的熱鈍化胎牛血清用在細(xì)胞培養(yǎng)中，來(lái)研究UCP-2及UCP-3 [3] ，核因子kappa-B [4] ，蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)FMDV衣殼蛋白 [5] ，亞臨床的移植物抗宿主病 [6] ，IFN-gamma的作用 [7] ，及自噬 [8] 。Thermo Fisher HyClone公司的熱鈍化胎牛血清用來(lái)研究能引起嚴(yán)重急性呼吸綜合征的冠狀病毒的核衣殼蛋白 [9] ，NO [10] ，激活素C [11] ，及IE1 [12] 。Sigma公司的熱鈍化胎牛血清用來(lái)研究化療 [13] ，而Equitech-Bio公司的熱鈍化胎牛血清用來(lái)研究谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶Pi [14] 。

活性炭處理

活性炭能夠結(jié)合脂溶性分子，因此能夠用來(lái)除去激素類物質(zhì)，例如，胎牛血清中的雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮及T3和T4分子。血清中這些脂類激素能夠干擾免疫檢測(cè)及胰島素檢測(cè)方法。

Thermo Scientific的活性炭吸附的胎牛血清（csFCS）被用來(lái)識(shí)別TGF-beta家族成員 [15] 。

透析處理

透析處理能夠除去胎牛血清中所有分子量小于10,000Da的分子。例如，激素、細(xì)胞因子、葡萄糖、氨基酸還有許多其它分子，都能夠被除去。透析也能除去胎牛血清中的抗生素及其它內(nèi)源分子。

Life Technologies的透析處理的胎牛血清被用來(lái)研究驅(qū)動(dòng)蛋白5B [16] 及丙酮酸激酶M2失活 [17] ，Thermo Fisher HyClone的透析處理胎牛血清用來(lái)研究KRAS信號(hào)通路的突變 [18] ，而Sigma公司的透析處理胎牛血清用來(lái)研究PAH代謝情況 [19] 。

gamma照射

Gamma照射能夠?qū)μヅＱ暹M(jìn)行滅菌處理。胎牛血清常規(guī)的滅菌方法是多次透過(guò)0.1um的濾膜以消除微生物污染，而gamma照射能夠鈍化牛群中常見(jiàn)的病毒。但是，一些類型的病毒能夠抵抗gamma照射，比如細(xì)小病毒。

低IgG含量

低IgG的胎牛血清適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域。

圖 2. HAKATA Life Technologies許可。

干細(xì)胞培養(yǎng)

與一般細(xì)胞培養(yǎng)相比，干細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生長(zhǎng)因子有更嚴(yán)格的要求。由于胎牛血清中的一些生長(zhǎng)因子促進(jìn)干細(xì)胞分化，所以，需要檢測(cè)各批胎牛血清在保持不同類型干細(xì)胞的性方面的性能。

來(lái)源地

胎牛血清的主要來(lái)源地就是那些大量養(yǎng)牛的國(guó)家，包括美國(guó)、澳大利亞、新西蘭、加拿大及南美和中美洲地區(qū)，由政府機(jī)構(gòu)管理血清制品的生產(chǎn)及收集過(guò)程。

胎牛血清分為美國(guó)農(nóng)業(yè)部（USDA）級(jí)和歐盟級(jí)。其中，美國(guó)農(nóng)業(yè)部級(jí)胎牛血清沒(méi)有瘋牛?。˙SE）及口蹄疫（FMD）污染，能夠出口到任何國(guó)家，而歐盟級(jí)胎牛血清只在大部分歐洲國(guó)家及亞洲國(guó)家銷售。

如何保存胎牛血清？

胎牛血清一般是在-5°到-20°之間凍存，2°到8°之間融化。一個(gè)比較好的辦法是，將胎牛血清分裝到50ml管中，這樣做就避免了反復(fù)凍融對(duì)血清造成的危害。血清融化后常出現(xiàn)沉淀，可能是血清蛋白變性造成的。簡(jiǎn)短離心即可除去沉淀，并且，這些沉淀一般不會(huì)影響血清質(zhì)量的。

胎牛血清的選擇

許多供應(yīng)商提供不同等級(jí)、不同來(lái)源及不同處理的胎牛血清。而胎牛血清是一種復(fù)雜的混合物，不同供應(yīng)商的不同批次產(chǎn)品肯定會(huì)有一些不同。因此，有必要建立一套選擇、評(píng)估胎牛血清的機(jī)制。

一般來(lái)說(shuō)，可以通過(guò)參考相關(guān)研究文獻(xiàn)選擇適合的胎牛血清。

Labome對(duì)212篇科研文獻(xiàn)做了關(guān)于胎牛血清使用情況的調(diào)查。