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新聞動態(tài) / news
HCT-8/V細胞- HCT-8/V耐藥株凍存
2017-04-12 瀏覽次數:1327
人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞
HCT8 V 貼壁上皮細胞
(2)客戶自備試劑
1)PBS
2)RPMI-1640培養(yǎng)基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
3)0.25% (W/V)胰蛋白酶(含0.02% EDTA)
人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞(3)細胞背景
1)生長方式:貼壁
2)種屬:Homo sapiens 人
(4)培養(yǎng)條件
1)培養(yǎng)基:RPMI-1640培養(yǎng)基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
2)溫度:37.0°C
3)氣體:空氣 95%,CO2 5%
(5)培養(yǎng)方法
收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:
如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細胞已長滿(達80-90%)。即可進行傳代,具體步驟如下:
1)棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶內加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液,輕輕吹打細胞。
3)加入等量的的培養(yǎng)液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)
4)傳代比例:1:2-1:3
人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞(6)常見問題及解決方案
1)培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。
2)細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。
細胞分離、培養(yǎng)、鑒定:
(1)從中國正常人、中國病人、小鼠、大鼠、兔、豬、牛等等組織中對原代細胞進行分離、培養(yǎng)、鑒定:我們將以客戶要求為標準,提供多種屬如中國正常人、中國病人、小鼠、大鼠、兔、豬、牛、其它動物原代細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定,并提供相應的文件、資料、數據和檢測證書。對于人源性細胞,必要時,在許可的條件下,我們盡可能的滿足客戶所提供的要求。
(2)從建立實驗性疾病動物(小鼠、大鼠、兔)模型體內組織中對人結腸癌長春新堿耐藥株,HCT8 V細胞進行分離、培養(yǎng)、鑒定: 我們將以客戶要求,建立標準實驗性疾病動物模型,或客戶提供實驗性疾病動物模型,對原代細胞進行分離、培養(yǎng)、鑒定,并提供相應的文件、資料、數據和檢測證書。